การแข่งขันฟุตบอลไทยแลนด์ อเมเจอร์ ลีก 2021 ได้เปิดให้ทีมที่สนใจเข้าร่วมแข่งขัน ได้ส่งรายชื่อทีมเข้าร่วมสมัครกันมาตั้งแต่วันที่ 2 เมษายน และตลอดสัปดาห์แรกของการเปิดสมัครแแข่งขัน ก็มีทีมที่ตกลงเข้าร่วมการแข่งขันแล้ว 40 ทีมด้วยกัน
โดยโซนที่มีทีมให้ความสนใจสมัครเข้าร่วมการแข่งขันมากที่สุด ก็เป็นโซนกรุงเทพมหานคร ที่มีทีมสมัครร่วมการแข่งขันถึง 8 ทีม นำโดย โดม เอฟซี ที่สมัครเข้าแข่งขันเป็นทีมแรก และสร้างผลงานที่โดดเด่น จากการไปถึงรอบ 32 ทีมสุดท้ายของช้าง เอฟเอ คัพ ปีนี้
ทีมต่อมาที่น่าจับตามองก็เป็น ปราจีนบุรี ซิตี้ ซึ่งการแข่งขันในซีซั่นก่อน พวกเขามีดีกรีเป็นถึงรองแชมป์โซนตะวันออก ก่อนที่ปีนี้พวกเขาจะหมายมั่นปั้นมือกลับมาท้าชิงตำแหน่งแชมป์อีกครั้ง
ขณะที่อีกทีมที่น่าจับตามอง ได้แก่ สมาคมกีฬาแห่งจังหวัดพิษณุโลก ที่ปีที่แล้ว พวกเขาสามารถคว้าแชมป์โซนภาคเหนือไปครองได้ แม้สุดท้ายจะมาพลาดท่าในรอบชิงแชมป์ประเทศก็ตาม
โซนเหนือตอนบน (5 ทีม) : ลำพูน เรนเจอร์, ซีเอ็ม สตาร์เลี่ยน เอฟซี, เชียงรายดราก้อน วีแบค เอฟซี, สิงห์เหนือ เชียงใหม่, โกสต์เกท เอฟซี
โซนเหนือตอนล่าง (4 ทีม) : ปากน้ำโพ เอฟซี, สวนกุหลาบ9 เอฟซีแอนด์อะคาเดมี, ชาติตระการซิตี้, สมาคมกีฬาแห่งจังหวัดพิษณุโลก
โซนตะวันออกเฉียงเหนือตอนบน (6 ทีม) : จัมปาศรี ยูไนเต็ด, ขอนแก่นสามใบเถา เอฟซี, มหาวิทยาลัยราชภัฏมหาสารคาม, ยูเนี่ยนโคราช, จันทรุเบกษา ฟุตบอลคลับ, มหาวิทยาลัยภาคตะวันออกเฉียงเหนือ
โซนตะวันออกเฉียงเหนือตอนล่าง (4 ทีม) : วารินชำราบ เอฟซี, ณัฐภัทร ทะเลสด เอฟซี, ราษีไศล ยูไนเต็ด, ร้อยเอ็ด2018
โซนกรุงเทพมหานคร (8 ทีม) : โดม เอฟซี, ไทยสปิริต เอฟซี, คอนเควสท์ เอฟซี, พิมาย ยูไนเต็ด, สมุทรปราการ ยูไนเต็ด, โรงแรมเมเปิล บางนา ฟุตบอลคลับ, ฮิปโป เอฟซี, ที เอ็ม ฟุตบอล คลับ
โซนปริมณฑล : -
โซนตะวันตกตอนบน (3 ทีม) : พัฒนานิคม ซิตี้, สิงห์บุรี บางระจัน เอฟซี, มหาวิทยาลัยเทคโนโลยีราชมงคลรัตนโกสินทร์
โซนตะวันตกตอนล่าง (4 ทีม) : ท่าม่วง เอฟซี, เคที ยูไนเต็ด, เอฟซี เขากำแพง, สถานีตำรวจดอนเมือง
โซนตะวันออกตอนบน (2 ทีม) : นครนายก เอฟซี, ปราจีนบุรี ซิตี้
โซนตะวันออกตอนล่าง (1 ทีม) : วิทยาลัยเทคโนโลยี ไฮเทค สระแก้ว
โซนตใต้ตอนบน (1 ทีม) : เอ็มเอช นครศรี เอฟซี
โซนใต้ตอนล่าง (2 ทีม) : ภูเก็ต อันดามัน เอฟซี, ยังสิงห์ ยูไนเต็ด
